Laboratoryjne potwierdzenie jaglicy – PCR, kultury i inne metody

Metody laboratoryjne w diagnostyce jaglicy odgrywają istotną rolę w potwierdzaniu rozpoznania klinicznego, szczególnie w obszarach nieendemicznych oraz w celach badawczych. Chociaż dostępnych jest kilka technik diagnostycznych, żaden uniwersalnie uznany złoty standard badania nie istnieje12.

Testy amplifikacji kwasów nukleinowych (NAAT)

Najlepszymi technikami laboratoryjnymi do potwierdzenia, że kliniczna diagnoza aktywnej jaglicy jest wynikiem ocznej infekcji Chlamydia trachomatis, są testy amplifikacji kwasów nukleinowych (NAAT), z których reakcja łańcuchowa polimerazy (PCR) jest jednym z przykładów. NAAT charakteryzują się wysoką czułością i specyficznością, ale są zbyt drogie i zbyt skomplikowane technicznie, aby były szeroko dostępne w większości miejsc, gdzie jaglica jest endemiczna3.

Testy NAAT są obecnie uznawane za najbardziej czułe narzędzia do wykrywania kwasów nukleinowych chlamydii. Chlamydia trachomatis może być izolowana w hodowli lub identyfikowana za pomocą testów amplifikacji kwasów nukleinowych i technik immunofluorescencji. Badania te powinny być wykonywane, gdy są łatwo dostępne, aby potwierdzić diagnozę i zapobiec progresji choroby w przypadkach niepewności diagnostycznej4.

Testy immunofluorescencyjne

Inne użyteczne techniki to bezpośredni test przeciwciał monoklonalnych znakowanych fluoresceiną (DFA) oraz test immunoenzymatyczny (EIA) rozmazy spojówkowego. Bezpośredni test przeciwciał fluorescencyjnych i test immunoenzymatyczny rozmazy spojówkowego stanowią alternatywne metody diagnostyczne35.

Badania wykazały, że dodatek testu przeciwciał monoklonalnych fluorescencyjnych do rutynowego barwienia metodą Giemsy zwiększa wykrywalność dodatnich próbek o 29 procent. Barwienie metodą Giemsy wykryło ciałka wtrętowe chlamydii w 34 procentach próbek, podczas gdy wolne ciałka elementarne zostały wykryte przez fluorescencyjne przeciwciała monoklonalne w 21 procentach przypadków6.

Hodowle komórkowe i cytologia

Nowsze metody diagnostyczne zastąpiły hodowlę komórkową, która była kryterium standardowym dla diagnozy laboratoryjnej. Hodowla komórkowa była wcześniej standardowym testem, ale została zastąpiona nowszymi testami o wyższej czułości i specyficzności35.

Cytologia metodą Giemsy polega na mikroskopowym badaniu wybarwionych wyskrobin spojówkowych w poszukiwaniu wewnątrzkomórkowych wtrętów. Ta metoda jest technicznie wymagająca, ma wysoką specyficzność, ale niską czułość. Wewnątrzkomórkowe wtrętowa chlamydii znajduje się w 10-60% wymazów spojówkowych wybarwionych metodą Giemsy od dzieci z ciężkim zapaleniem37.

Ograniczenia testów laboratoryjnych: Chociaż hodowla jest czułym testem na obecność żywych organizmów, a testy amplifikacji kwasów nukleinowych są czułymi i specyficznymi narzędziami do wykrywania kwasów nukleinowych chlamydii, dostępne obecnie testy komercyjne są zbyt drogie, zbyt złożone lub zbyt zawodne do użycia w programach krajowych.

Wyzwania w stosowaniu testów laboratoryjnych

Wykrycie laboratoryjne Chlamydia trachomatis jest problematyczne z kilku powodów. Po pierwsze, wymaga wyrafinowanego sprzętu, który jest trudny do zdobycia lub nawet utrzymania w społecznościach endemicznych pod względem jaglicy. Po drugie, często wymagane są usługi specjalistycznego mikrobiologa lub patologa w celu dokonania dokładnej i spójnej diagnozy C. trachomatis8.

Po trzecie i najważniejsze jest to, że objawy kliniczne jaglicy są słabo skorelowane z rzeczywistymi dowodami infekcji wykazywalnymi w laboratorium. Dla celów operacyjnych każda modalność diagnozy C. trachomatis będzie musiała być tania i niezawodna oraz zapewniać szybkie wyniki8.

Korelacja między objawami klinicznymi a testami laboratoryjnymi

Autorzy komentowali słabą korelację między badaniem klinicznym a PCR, szczególnie w obszarach o niskim rozpowszechnieniu jaglicy. Prawdą jest, że duża część osób z aktywną jaglicą (TF), w tym niektóre z intensywnym zapaleniem (TI), nie ma wykazywanych organizmów w testach punktowych. Jednak odzwierciedla to patogenezę jaglicy jako choroby immunologicznie uwarunkowanej, a nie jakąś nową rozbieżność z teorią zarazków9.

Obecność objawów klinicznych aktywnej jaglicy (TF i TI) jest słabo skorelowana z wykryciem infekcji, szczególnie po masowym podawaniu leków, gdzie objawy kliniczne mają tendencję do przeszacowywania rozpowszechnienia w stosunku do infekcji10.

Nowe technologie diagnostyczne

Istnieje pilna potrzeba szybkiego, niezawodnego testu na C. trachomatis, aby pomóc w pomiarze postępu w kierunku eliminacji jaglicy. Badania wykazały, że testy na infekcję, w tym laboratoryjne testy amplifikacji kwasów nukleinowych, mogą być opłacalne, szczególnie gdy ich użycie skutkuje zatrzymaniem lub nie rozpoczynaniem masowego podawania leków210.

Opracowano prototypowy test typu „point-of-care” (POC) do diagnozy terenowej ocznej C. trachomatis, jednak w obecnym formacie nie jest odpowiedni do diagnozy terenowej, ponieważ jego specyficzność zmniejsza się w gorących i suchych warunkach – środowisku, w którym jaglica występuje głównie11.

Pytania i odpowiedzi

Które testy laboratoryjne są najdokładniejsze w diagnostyce jaglicy?

Testy amplifikacji kwasów nukleinowych (NAAT), szczególnie PCR, są najbardziej czułe i specyficzne. Mają wysoką dokładność w wykrywaniu Chlamydia trachomatis, ale są drogie i skomplikowane technicznie.

Dlaczego testy laboratoryjne nie są rutynowo stosowane w obszarach endemicznych?

Główne przyczyny to wysokie koszty, złożoność techniczna, brak odpowiedniego sprzętu i wykwalifikowanego personelu w obszarach endemicznych. Diagnoza kliniczna jest tam wystarczająca i praktyczna.

Czy wynik ujemny testu laboratoryjnego wyklucza jaglicę?

Nie zawsze. Objawy kliniczne jaglicy mogą utrzymywać się dłużej niż infekcja, ponieważ choroba ma podłoże immunologiczne. Test może być ujemny mimo obecności objawów klinicznych.

Jakie są alternatywy dla drogich testów PCR?

Alternatywami są testy immunofluorescencyjne (DFA), testy immunoenzymatyczne (EIA) oraz cytologia metodą Giemsy. Są tańsze, ale mają niższą czułość i wymagają doświadczonego personelu.

Reklama
Reklama