Diagnostyka ospy prawdziwej stanowi szczególne wyzwanie w dzisiejszych czasach, gdy choroba została całkowicie wyeliminowana z naturalnego środowiska1. Większość pracowników służby zdrowia prawdopodobnie nie rozpoznałaby wirusa we wczesnych stadiach, co mogłoby umożliwić rozprzestrzenianie się infekcji2. Dlatego też opracowano szczegółowe protokoły diagnostyczne, które pozwalają na szybkie i pewne rozpoznanie choroby.
Kryteria kliniczne rozpoznania ospy prawdziwej
Centrum Kontroli i Prewencji Chorób (CDC) opracowało narzędzie diagnostyczne dla klinicystów, które opiera się na głównych i pomocniczych kryteriach diagnostycznych1. Kliniczna definicja ospy prawdziwej obejmuje chorobę o ostrym początku z gorączką równą lub przekraczającą 38,3°C, po której następuje wysypka charakteryzująca się twardymi, głęboko osadzonymi pęcherzykami lub ropniakami bez innej widocznej przyczyny3.
Główne kryteria diagnostyczne obejmują gorączkowy okres wstępny występujący od 1 do 4 dni przed pojawieniem się wysypki, z gorączką 38,3°C i co najmniej jednym z następujących objawów: osłabienie, ból głowy, ból pleców, dreszcze, wymioty lub silny ból brzucha4. Klasyczne zmiany skórne ospy prawdziwej to głęboko osadzone, twarde, okrągłe, dobrze odgraniczone pęcherzyki lub ropniaki5. Istotną cechą jest to, że na każdej części ciała wszystkie zmiany znajdują się w tym samym stadium rozwoju6.
Pomocnicze kryteria diagnostyczne
Pomocnicze (drugorzędne) kryteria diagnostyczne obejmują odśrodkowy rozkład wysypki, gdzie największe skupisko zmian występuje na twarzy i kończynach7. Pacjent może wyglądać na ciężko chorego lub zatruty, z powolnym rozwojem wysypki od plam do grudek, a następnie do ropniaków w ciągu kilku dni. Charakterystyczne są również zmiany na dłoniach i podeszwach stóp7.
Odśrodkowy rozkład zmian, bardziej widoczny na twarzy i kończynach niż na tułowiu, jest charakterystyczną cechą diagnostyczną ospy prawdziwej, która pozwala doświadczonemu oku na podejrzenie choroby8. Ta specyficzna dystrybucja wysypki stanowi jeden z najważniejszych elementów różnicujących ospę prawdziwą od innych chorób wysypkowych.
Różnicowanie z innymi chorobami
Najczęściej mylonym z ospą prawdziwą schorzeniem jest ospa wietrzna (varicella)6. W przeszłości ospa prawdziwa była czasami mylona z ospą wietrzną, która jest światową infekcją dzieci rzadko śmiertelną8. Inne choroby, które należy uwzględnić w diagnostyce różnicowej, to opryszczka półpaścowa, rumień wielopostaciowy, kontaktowe zapalenie skóry oraz różne infekcje wirusowe9.
Krwotoczna postać ospy prawdziwej rozwija się błyskawicznie i była najczęściej mylona z sepsa meningokokową lub ostrą białaczką9. Kontaktowe zapalenie skóry, choć często pęcherzykowe, można odróżnić od zmian ospowych, ponieważ wywołuje świąd i nie towarzyszy mu gorączka ani objawy ogólne9.
Metody laboratoryjne potwierdzenia diagnozy
Ostateczna diagnostyka laboratoryjna ospy prawdziwej obejmuje hodowlę wirusa na błonie kosmówkowo-omoczniowej (część zarodka kurczego) i badanie powstałych zmian w określonych warunkach temperaturowych3. Szczepy charakteryzuje się za pomocą reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) i analizy polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP). Opracowano również testy serologiczne i immunoenzymatyczne (ELISA), które mierzą swoiste immunoglobuliny i antygeny wirusa variola3.
Kryteria laboratoryjne dla diagnozy obejmują identyfikację DNA wirusa variola w próbce klinicznej za pomocą PCR lub izolację wirusa ospy prawdziwej z próbki klinicznej w referencyjnym laboratorium WHO z potwierdzeniem PCR10. Generyczne testy PCR na ortopokswiruses oraz identyfikacja pokswirusa w próbce klinicznej za pomocą mikroskopii elektronowej z barwieniem negatywnym są sugestywne dla infekcji ortopokswirusowej, ale nie są diagnostyczne dla ospy prawdziwej10.
Procedury pobierania próbek i bezpieczeństwo
Diagnostyczne próbki, które można wykorzystać, obejmują płyn z pęcherzyków lub ropniaków, biopsję strupów, wymaz z gardła oraz krew z skrzepem11. Próbki kliniczne od podejrzanych przypadków muszą być obsługiwane z należytą ostrożnością, uwzględniając prawdopodobieństwo obecności wirusa ospy prawdziwej i przestrzegając odpowiednich procedur11.
Wirus ospy prawdziwej jest wysoce zakaźny, dlatego manipulowanie materiałem próbkowym powinno być unikane, ale jeśli jest konieczne, należy stosować praktyki poziomu bezpieczeństwa biologicznego 312. Laboratoria poziomu A nie powinny podejmować prób hodowli ani wykonywania testów diagnostycznych na próbkach podejrzanych o zawieranie wirusa ospy prawdziwej12.
Współczesne możliwości diagnostyczne
W 2017 roku FDA zatwierdziła test wykrywania kwasów nukleinowych wirusa Variola, który jest wskazany dla osób z ropniakową lub pęcherzykową chorobą wysypkową lub innymi objawami infekcji wirusem Variola13. Testy diagnostyczne dla wirusa variola są dostępne tylko w wybranych laboratoriach sieci LRN, głównie ze względów bezpieczeństwa biologicznego i tylko w ramach algorytmu testowania klinicznego14.
Obecnie nie opracowano zatwierdzonych przez FDA testów serologicznych dla ospy prawdziwej, a testy oparte na białkach są nadal badane14. Potrzebne są testy, które mogą dokładniej wykrywać ospę prawdziwą i inne ortopokswiruses niż te dostępne obecnie; wysiłki powinny koncentrować się na adaptacji multipleksowych testów kwasów nukleinowych dla nowych platform i ustawień terenowych14.













